细胞培养室的无菌建设及注意事项涉及多个方面,以下是球盟会官网入口未来对这些方面的详细阐述:
一、无菌室的结构与布局
- 更衣间:供实验人员更换衣服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套,以减少将外部污染物带入无菌室的风险。
- 缓冲间:位于更衣间与无菌操作间之间,用于放置恒温培养箱及某些小型仪器,同时确保无菌操作间的无菌环境。缓冲间的门应与无菌操作室的门错开,避免同时开启,以减少污染风险。
- 无菌操作间:专用于无菌操作和细胞培养。其大小应适当,顶部高度不超过2.5米,以保证紫外线的灭菌效果。墙壁应光滑无死角,便于清洁和消毒。
二、设备与设施
- 洁净工作台(超净台):利用空气层流装置排除工作台面上的尘埃和微生物,是细胞培养中必需的设备。
- CO₂培养箱:为细胞提供一个体外培养的舒适环境,如适宜的温度、CO₂浓度和湿度等。
- 显微镜:用于观察细胞的生长情况和污染状况。
- 其他设备:如超纯水机、单细胞悬液制备仪、离心机、天平、消毒器、滤器、干燥箱等,用于满足细胞培养过程中的各种需求。
三、无菌操作
- 实验前准备:实验前要对试验台进行紫外消毒灭菌,所有用品要使用高压蒸汽灭菌,双手进行操作时要进行75%酒精消毒,实验仪器过火处理。
- 操作规范:实验过程中应严格遵守无菌操作规范,如穿戴适当的个人防护装备,避免交叉污染;操作区域应保持清洁及宽敞,必要物品可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出;不同种细胞要分开操作,避免交叉感染。
- 物品摆放:超净台里面的物品应按照左右手原则摆放,避免在需要处理的细胞上面操作;操作时,盖子(培养瓶盖、培养基盖等)操作尽量放置在远离中央操作区域,且自己的双手不能过瓶身中央。
四、材料准备
- 无菌物品:无菌物品应保存在无菌包或灭菌容器内,并按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内。
- 培养基与试剂:使用无菌的哺乳牛血清等培养基成分,并在低温下储存。配制各种培养液及试剂等均需使用高纯度的水,如三次蒸馏水。
- 塑料制品与玻璃仪器:使用新的、未污染的塑料制品和玻璃仪器,并在使用前进行必要的清洁和消毒处理。
五、通风与清洁
- 通风系统:球盟会官网入口应有良好的通风系统,确保空气流通和减少污染。空气洁净度应达到相应级别,如洁净级或超净级,以保证细胞生长环境的无菌、无污染。
- 清洁与消毒:定期清洁和消毒球盟会官网入口环境,包括地面、墙壁、工作台等。使用合适的消毒剂,如70%的乙醇、有效次氯酸钠等,并正确配制和使用。
六、储藏与消毒
- 储藏设备:如冰箱、细胞冷冻储存器等设备应定期检查、清洗和消毒,以确保其无菌状态。冰箱应专用于细胞培养相关物品的储存,并保持清洁。
- 储存条件:细胞培养相关物品应按照其储存条件进行储存,如温度、湿度等。对于需要冷冻保存的物品,应使用液氮容器等专用设备进行储存,并定期补充液氮以保持其储存温度。
综上所述,细胞培养室的无菌建设及注意事项涉及多个方面,包括无菌室的结构与布局、设备与设施、无菌操作、材料准备、通风与清洁、储藏与消毒等。严格遵守这些要求和注意事项可以确保细胞培养过程中的无菌环境保障实验结果的准确性和可靠性。